В 1325 году литовский князь Гедимин разбил русское войско князя Святослава в битве при реке Ирпень и завладел Киевским княжеством.
В 1362 году литовский князь Ольгерд разбил армии Золотой Орды в сражении у Синих Вод и окончательно включает большую часть территории Украины до Черного моря в состав Великого Княжества Литовского, Руського и Жемойтского, считавшего себя правопреемником Киевской Руси. В него вошло три четверти русских городов.
По договору в 1387 году Польское королевство присваивает Галицкую и Холмскую земли, а Прикарпатская Русь отошла к Венгрии.
На протяжении XVI века появляются три издания правового кодекса Литовской державы – Литовские статусы, аналогичных «Русской Правде».
Украинские города наравне с другими городами Великого княжества получили Магдебургское право, сохранявшееся до XIX века. Еще одной формой самоуправления горожан Великого княжества были цеховые организации ремесленников со своими уставами, которые регламентировали стандарты выпускаемой продукции, этические нормы для мастеров и подмастерьев. Получили дальнейшее развитие и вечевые традиции Руси.
На протяжении «литовской эпохи» на украинских землях не было зафиксировано каких-нибудь значительных выступлений против литовского господства, так как они перенимали язык, культуру и веру Руси.
28 июня 1569 года была подписана Люблинская уния и произошло добровольное объединение Великого княжества Литовского и Королевства Польского в единое государство – Речь Посполитую. Киевщина, Брацлавщина, Подолье, Подляшье и Волынь перешли под власть Польши.
В 1596 году подписана Брестская уния Православной церкви Киевской митрополии с Католической церковь, что вызвало переход части украинской знати в католицизм. Наступление католической церкви на украинские земли вызвало сопротивление, появилось братское движение.
Археологические раскопки, проводимые в районе поселка Маяк, свидетельствуют, что территория современной Керчи была заселена уже в XVII-XV веках до н.э., первыми здесь поселились киммерийцы, однако летописная история города началась с Боспорского царства.
В Киевской Руси, после ее распада на отдельные княжества, в первое время владение Киевским великокняжеским столом обеспечивало князю старейшинство в роде.
Город Изюм сегодня – промышленный и культурный центр региона; является региональным транспортным узлом - через город проходит европейский автотранспортный коридор Львов – Киев –Харьков – Донбасс – Ростов-на-Дону (М-03). Железнодорожная станция «Изюм» на линии Харьков-Дебальцево. Ведущие отрасли промышленности – приборостроение и оптическая промышленность.
Глухов является одним из старейших городов страны – древнерусский город Черниговского княжества впервые упоминается в Ипатьевской летописи под 1152 год. Однако существовал он значительно раньше, поскольку в некоторых исторических источниках упоминается под 992 год. Первыми поселенцами здесь были северяне, которые оставили после себя Глуховское городище VI-VIII веков.
Точная дата основания Конотопа не известна, поскольку разными учеными называются разные даты возникновения Конотопа. Предполагают, что Конотоп существовал еще во времена Киевской Руси как пограничный городок Сиверского княжества.
Основали Ахтырку украинские казаки и крестьяне, переселившиеся с Правобережной Украины, на месте старославянского городища. Большинство исследователей считает, что название города Ахтырка – это искаженное тюркское «Ак Тур» - Белая Гора, однако существует версия, что его название происходит от протекающей через город одноименной реки Ахтырки, что в переводе с тюркского значит «ленивая река».